Viabilidade de fibroblastos do ligamento periodontal estimulados com sobrenadante necrótico de células de polpa dental in vitro
Cardoso PES, Sipert CR
Dentística - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - SÃO PAULO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
Células necróticas induzem a instalação de processos inflamatórios importantes, mesmo em ambientes estéreis, e o mecanismo no qual as células mortas agem ainda não é conhecido dentro da etiopatogenia da periodontite apical. O objetivo desse estudo foi avaliar a capacidade celular in vitro de células de ligamento periodontal por sobrenadante necrótico de células de polpa dental. Cultura de fibroblastos de polpa dental (FPD) e de ligamento periodontal (FLP) foram descongelados a partir do Biobanco da FOUSP. Os FDP foram submetidos a ciclos de congelamento e descongelamento para produzir sobrenadante necrótico (SN) de FPD, e diluídos: 1/2, 1/10, 1/20 para uso como estímulo. Os FLP foram estimulados com o SN de FPD nas diluições indicadas. Como controle positivo, foi utilizado DMEM 1% SBF (Soro Bovino Fetal) e negativo o LPS (Lipopolissacarídeo Escheria coli) a 1ug/mL. A incubação decorreu por 24, 48 e 72 h a 5% de CO2 a 37ºC. A citotoxicidade foi avaliada empregando o reagente Alamar Blue (10% volume) e MTT (brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl) -2,5-difenil tetrazolium). Realizada a leitura do Alamar (570/ 600 nm) e MTT (570 nm) no espectofotômetro. Foi aplicado o teste Anova com nível de significância de 5%. Nos ensaios de Alamar Blue 72h, teve diferença estatística do grupos SN 1/10 e 1/20 para Meio 1% e LPS. Nos resultados de MTT de 24 h, houve diferença estatística do controle positivo para os demais grupos, estes apresentando maior viabilidade celular. Os sobrenadantes necróticos de FDP ativaram a proliferação de FLP e induziram uma resposta sugestiva de ativação celular.PN0557 - Painel Aspirante
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3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia
Avaliação da eficácia antimicrobiana do enxaguatório de extrato de própolis vermelha em pacientes com e sem aparelho ortodôntico fixo
Ruivo AK, Costa MS, Neves JG, Aro A, Furletti VF, Costa AR
Programa de Pós Graduação Em Odontologia - CENTRO UNIVERSITÁRIO DA FUNDAÇÃO HERMÍNIO OMETTO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
O objetivo foi comparar a eficácia antimicrobiana dos enxaguatórios bucais contendo extrato de própolis vermelha (EXPV), clorexidina 0,12% (CLX), e placebo (PL). O estudo clínico foi controlado, duplo cego e emparelhado. Foram selecionados 45 voluntários de ambos os sexos distribuídos em dois grupos sendo 20 voluntários que faziam uso de aparelho ortodôntico convencional e 25 que não o utilizavam. Os pacientes foram submetidos aos exames de Índice de Placa de Ciâncio (IPC), Índice de sangramento gengival (ISG) e as substâncias passaram por análise sensorial do sabor e de toxicidade seletiva (MTT). Os dados IPC, ISG, MTT e sensorial foram realizados por meio de Mann Whitney e Wilconson. O enxaguatórios EXPV e CLX diminuiram significativamente as UFC/mL de microrganismos totais (p<0,05). Para o ISG, observou-se redução após o uso de CLX e EXPV (p<0,05). Em relação ao IPC, não houve diferença entre os grupos (p<0,05). As análises sensoriais revelaram que CLX apresentou sabor desagradável e que EXPV agradou os avaliadores. Não houve diferença de toxicidade entre os enxaguatórios (p<0,05). Pode-se concluir que o enxaguatório de própolis vermelha apresentou efetividade antimicrobiana em relação aos microrganismos avaliados, com redução do biofilme dentário e melhora no quadro clínico inflamatório dos pacientes com boa aceitabilidade do seu sabor.PN0558 - Painel Aspirante
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3 - Fisiologia / Bioquimica / Farmacologia
Efeitos do cinamaldeído na modulação da resposta funcional de células mononucleares do sangue periférico de origem humana
Oliveira ICV, Silva MD, Galvão Moreira LV, Vilela JL, Branco-de-Almeida LS, Cardoso CRB
Ppgo - UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
O presente estudo avaliou a influência do cinamaldeído, um óleo essencial capaz de reduzir a reabsorção óssea alveolar in vivo, na produção de citocinas e na proliferação de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de origem humana. PBMCs obtidas de indivíduos saudáveis foram estimuladas com Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa; concentração: 1x107) na presença ou ausência do cinamaldeído (Sigma(r); 5, 20 e 40 µM) e/ou veículo (dimetilssufóxido 0,2%) por 06 horas. As concentrações de IL-1β, TNF-α, IL-6 e IL-10 nos sobrenadantes foram quantificadas por ELISA. Em outro modelo, PBMCs foram estimuladas com fitohemaglutinina (PHA, 50 μg /mL) e cinamaldeído/ veículo por cinco dias para avaliação da proliferação de linfócitos T por citometria de fluxo, e das concentrações de IFN-γ e IL-10 nos sobrenadantes por ELISA. Os dados foram analisados utilizando-se ANOVA/Kruskall-Wallis, seguidos pelos testes de Tukey/Dunn (nível de significância: 5%). A estimulação com Aa aumentou a produção das citocinas nos sobrenadantes das PBMCs, e a adição de cinamaldeído suprimiu a produção de IL-1β (P<0.05). Ainda, o cinamaldeído reduziu a proliferação de linfócitos T causada pelo PHA de maneira dose-dependente (P<0,05), atenuando a produção de IL-10, no sobrenadante das PBMCs (P<0,05). O cinamaldeído modulou a produção de citocinas e a proliferação de linfócitos T em modelos de PBMCs, sugerindo um potencial para regular respostas imunes inatas/adaptativas no contexto na periodontite. (Apoio: FAPs - Fapema)PN0559 - Painel Aspirante
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3 - Fisiologia / Bioquimica / Farmacologia
Análise in vivo da influência de diferentes medicações anti-inflamatórias na neoformação óssea e modulação do processo inflamatório
Pugliese CS, Martinez EF, Montagner PG, Daruge RJ, Motta RHL, Fernandes MRU, Ramacciato JC
Ctbmf - FACULDADE DE ODONTOLOGIA SÃO LEOPOLDO MANDIC
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
Apesar de largamente utilizados na prática clínica, não existe consenso sobre o impacto de diferentes classes de anti-inflamatórios no reparo ósseo. Assim, o objetivo deste estudo in vivo foi avaliar a influência de 3 tipos de anti-inflamatórios, Dexametasona, Cetoprofeno e Parecoxibe, no reparo ósseo e resposta inflamatória. Foram utilizados 60 ratos, divididos em 4 grupos (n=15 cada), sendo realizados 3 tempos de análises (3, 7 e 21 dias): G1 - Controle (sem medicação), G2 - Dexametasona (0,52 mg/kg/dia), uma dose 1 h antes da cirurgia e outra após 24 h, G3 - Cetoprofeno (12,5 mg/kg/dia) , G4 - Parecoxibe (6,4 mg/kg/dia), sendo para ambos uma dose 1 h antes da cirurgia e a mesma dose a cada 12 h por 5 dias. Foram realizados defeitos de 4 mm de diâmetro nas calvárias. Por meio de análises histológicas e histomorfométricas foi mensurada a intensidade de infiltrado inflamatório e presença de neoformação e maturação óssea. A análise estatística foi realizada adotando-se nível de significância de 5%. A inflamação foi presente com 3 e 7 dias, sendo que G3 e G4 apresentaram menores escores que G1, enquanto G2 não apresentou diferença significante (p>0,05). Com 7 dias, G2 e G4 apresentaram maior formação óssea que G1 (p<0,05). Aos 21 dias, G4 apresentou neoformação óssea imatura se comparada com os demais grupos. Conclui-se que nenhum dos anti-inflamatórios testados mimetizando as doses e períodos utilizados clinicamente causaram efeitos deletérios na neoformação óssea. Porém, observa-se que os anti-inflamatórios seletivos de COX-2 retardam a mineralização e maturação óssea.PN0560 - Painel Aspirante
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3 - Fisiologia / Bioquimica / Farmacologia
Ação de um nanocarreador de miconazol sobre biofilmes microcosmos salivares
Caldeirão ACM, Araujo HC, Tomasella CM, Sampaio C, Oliveira MJS, Pessan JP, Monteiro DR
UNIVERSIDADE DO OESTE PAULISTA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
Este estudo avaliou os efeitos de um nanocarreador de miconazol (MCZ) sobre biofilmes microcosmos salivares. O nanocarreador foi preparado através da conjugação de MCZ com nanopartículas de óxido de ferro (NPsOF) cobertas com quitosana (QTS).Para a obtenção do inóculo microbiano final, pool de saliva de dois doadores saudáveis foi suplementado com Candida albicans e Candida glabrata. Os biofilmes foram desenvolvidos por 96 horas sobre discos de vidro posicionados no Amsterdam Active Attachment model. Após, os biofilmes foram expostos por 24 horas ao composto NPsOF-QTS carreando MCZ a 78 (NPsOF-QTS-MCZ78)ou 156 µg/mL (NPsOF-QTS-MCZ156). MCZ a 156 µg/mLfoi utilizado como controle positivo, enquanto o biofilme formado por 120 horas na ausência de drogas foi o controle negativo (CN). A eficácia do nanocarreador foi testada através da contagem de unidades formadoras de colônias (UFCs), composição da matriz extracelular (proteínas, carboidratos e DNA) e ensaio de produção de ácido lático. Os dados foram analisados estatisticamente por ANOVA a um critério e teste de Fisher LSD (α = 0,05). NPsOF-QTS-MCZ156 diferiu estatisticamente dos demais grupos e gerou as maiores reduções nas UFCs de aeróbios e anaeróbios totais, Streptococcus do grupo mutans, Lactobacillus spp.,C. albicans e C. glabrata. NPsOF-QTS-MCZ156 e MCZ reduziram significativamente a produção de ácido lático e aumentaram carboidratos e DNA da matriz extracelular comparados ao CN. Esses achados reforçam o uso do nanocarreador de MCZ como alternativa efetiva no combate às infecções fúngicas orais. (Apoio: CAPES N° 001 | FAPESP N° 2017/24416-2)PN0561 - Painel Aspirante
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3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia
A influência da 3' sialolactose e do colostro humano na formação de biofilmes de Candida albicans
Faria JB, Santiago MB, Silva CB, Geraldo-Martins VR, Nogueira RD
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
O objetivo do estudo foi avaliar in vitro a adesão inicial e a biomassa formada do biofilme de Candida albicans (CA) na presença de colostro (C) com ou sem saliva (S) e 3' Sialolactose (SI). Foram coletadas 30 amostras de colostro e saliva de recém-nascidos de indivíduos com boa saúde geral e bucal após o parto. Os grupos experimentais foram divididos nos que receberam colostro antes (C-A), durante (C-DU) e após 24 horas (C-DE) à aplicação da cultura microbiana. Foi testada a aplicação de saliva apenas (S-A) e em conjunto com colostro (C+S-A) antes da formação do biofilme. Os grupos 3' Sialolactose receberam o oligossacarídeo em duas concentrações antes (SI-A), durante (SI-DU) e após (SI-DE) o inóculo microbiano. Esses grupos foram comparados com biofilmes de 24h (B24h) e 48h (B48h). Os biofilmes foram cultivados em placas de 96 poços por 24h a 37°C. As densidades ópticas foram medidas a 490nm em espectrofotômetro digital. Os biofilmes formados nos grupos CA-SA e CA-C-DE não diferiram dos controles (p <0,05), mas sim quando o colostro foi aplicado após (CA-C-DE) e na presença de saliva (CA-SA), a DO dos biofilmes foi estatisticamente inferior as obtidas nos grupos controle (p<0,05). A aplicação de Sialolactose reduziu a formação de biofilme CA em CA-SI-A e CA-SI-DU (p <0,05). Conclui-se que o colostro não altera a adesão ou crescimento de Candida albicans, mas a saliva reduz a densidade da biomassa fúngica. A 3' Sialolactose interfere na adesão e no crescimento de ambos os biofilmes, sendo um importante componente do colostro com atividade antimicrobiana. (Apoio: CAPES N° 2848/2011)PN0562 - Painel Aspirante
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3 - Fisiologia / Bioquimica / Farmacologia
Efeito do alendronato de sódio sobre a secreção de metaloproteases 2 e 9 em culturas de fibroblastos gengivais humanos
Marin R, Greco BB, Martinez EF, Teixeira LN
FACULDADE DE ODONTOLOGIA SÃO LEOPOLDO MANDIC
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
O propósito deste estudo foi avaliar o efeito do alendronato de sódio (ALS) sobre a quantificação dos níveis das metaloproteases (MMP) 2 e 9 em culturas de fibroblastos gengivais humanos (FGH). Para isto, FGH foram cultivados em placas de 24 poços, na densidade de 110 células/mm2. Após 24 h, as células foram expostas ao ALS nas concentrações de 0,1µM, 1µM, 5µM e 50µM. Após 24h, 48h e 72h de exposição ao ALS, o meio de cultura foi coletado e os níveis de MMP-2 e 9 foram quantificados por ELISA. Culturas não expostas foram utilizadas como controle. Os dados foram analisados por meio do teste de Kruskal-Wallis, com nível de significância de 5%. Após 24h e 48h, notou-se expressão variável de MMP-2 em FGH expostos ao ALS em diferentes concentrações em relação ao controle (p<0,05). Nestes mesmos períodos não foram identificadas diferenças de expressão de MMP-9 entre os grupos avaliados (p>0,05). Após 72h, todas as concentrações avaliadas promoveram redução na expressão de MMP-2 e MMP-9 em FGH em comparação ao controle (p<0,05). Estes achados sugerem que a exposição prolongada ao ALS pode reduzir a secreção de MMP por FGH e contribuir para o surgimento de úlceras bucais ou mesmo prejudicar o processo de cicatrização da mucosa oral.PN0563 - Painel Aspirante
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3 - Fisiologia / Bioquimica / Farmacologia
Influência de duas classes de antidepressivos na osteogênese in vitro
Pereira-Junior NM, Martinez EF, Motta RHL, Ciotti DL, Ramacciato JC
FACULDADE DE ODONTOLOGIA SÃO LEOPOLDO MANDIC
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
A depressão é uma perturbação neurobiológica considerada uma das principais causas de incapacitação no mundo. Dos tratamentos indicados, destacam- se o uso de fármacos antidepressivos tricíclicos (ADTs) e os inibidores seletivos da recaptação de serotonina (ISRS). Estudos anteriores tem associado o uso desses fármacos com um impacto negativo no metabolismo ósseo. O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar a influência de ADTs e ISRS sobre o metabolismo ósseo. Foram utilizadas uma linhagem de células osteoblásticas humanas (SaOS-2) suplementadas com doses dos fármacos variando entre 10 a 30 µM. Como controle, as células foram mantidas apenas em meio basal. Após 24, 48 e 72 h, avaliou-se a proliferação e viabilidade celular pelos ensaios de Azul de Trypan e MTT. Adicionalmente, os níveis de transcritos de marcadores da diferenciação osteoblástica como osteocalcina (OC), sialoproteína óssea (BSP) e colágeno (COL), foram avaliados por qPCR. Os dados foram tabulados e submetidos à análise estatística, tendo sido adotado nível de significância de 5%. Para ambos os fármacos, os resultados revelaram uma redução da proliferação e da viabilidade celular de forma dose-dependente (p<0,05), bem como uma redução significativa da expressão gênica de OC, BSP e COL (p<0,05). Os resultados indicam que os fármacos estudados podem impactar negativamente o metabolismo ósseo e comprometer o sucesso dos procedimentos clínicos que envolvam regeneração óssea.PN0564 - Painel Aspirante
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3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia
Estudo comparativo de tecnologias laboratorias para avaliaçao de viabilidade celular in vitro
Rahhal JG, Ruy GP, Sipert CR
Dentística - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - SÃO PAULO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
A viabilidade celular pode ser definida como o número de células saudáveis em uma amostra e apresenta papel fundamental principalmente nos experimentos que envolvem a avaliação da citotoxicidade de um material. Esse trabalho comparou o método MTT com o de exclusão por Azul de Trypan para avaliação da viabilidade de células da papila apical (CPA) in vitro quando em contato com hidróxido de cálcio (HC). Em um dos ensaios realizados, CPA foi tratada com HC a 1000 e 250 µg/mL por 5 dias. Em outro ensaio, CPA foi mantida em meio α-MEM acrescido de Soro Bovino Fetal (SBF) na concentração de 0,5% e 15% por 1, 3, 7 e 14 dias. A viabilidade celular foi avaliada por MTT e Azul de Trypan. No primeiro experimento, a análise foi feita por Kruskal-Wallis para os dados obtidos por MTT e ANOVA para a contagem celular. No segundo experimento, ANOVA para ambos os métodos. Os dados do MTT no primeiro ensaio não demonstraram diferenças estatísticas significativas entre as concentrações de HC testadas, enquanto que por meio da contagem de células viáveis houve aumento significativo de citotoxicidade proporcionalmente à concentração de HC. No segundo ensaio, houve diferença estatística significativa quanto aos dados de viabilidade celular entre as concentrações 0,5% e 15% de SBF com aumento da população celular de forma proporcional à concentração de SBF demonstrada de forma similar por ambos os métodos. O uso isolado do método MTT para estudos de viabilidade pode não demonstrar acurácia para a avaliação da citotoxicidade de determinados materiais odontológicos como o hidróxido de cálcio. (Apoio: CNPq | FAPs - FAPESP | CAPES)PN0566 - Painel Aspirante
Área:
3 - Fisiologia / Bioquimica / Farmacologia
Cinamoiloxi-mammeisina isolada da geoprópolis brasileira inibe a diferenciação de linfócitos Th17 humanos
Breseghello I, Prado DS, Sberci WAP, Gonzaga VR, Mariano RC, Alencar SM, Rosalen PL, Franchin M
UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA - ARAÇATUBA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
O presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade do cinamoiloxi-mammeisina (CNM), uma 4-fenil cumarina isolada de uma geoprópolis brasileira na diferenciação dos linfócitos Th17 humanos. A geoprópolis de Melipona scutellaris foi obtida na cidade de Entre Rios (lat. º22 'S, long. 37º54' W), estado da Bahia, Brasil. O isolamento do composto CNM foi realizado por CLAE-FR. As células mononucleares do sangue periférico foram obtidas de indivíduo saudável (CAAE 12616119.5.0000.5418 - aprovado em 11/08/2019), separadas por gradiente de Percoll e estimuladas com IL-1β, IL-21, IL-23, TGF-β e IL-6 por 5 dias. A leitura dos linfócitos diferenciados foi realizada em um citômetro de fluxo FACSVerse. A análise estatística foi realizada utilizando ANOVA seguido do teste Tukey (p < 0.05). De acordo com os resultados, foi verificado que o tratamento com CNM a 10µM reduziu a diferenciação dos linfócitos Th17 humanos, quando comparado ao grupo que recebeu o veículo de dissolução do composto (p<0,05). Os dados obtidos neste estudo, confirmam os resultados constatados em camundongos e, portanto, demonstra a atividade promissora do composto CNM em atuar no controle de doenças inflamatórias dependentes de linfócitos Th17. (Apoio: CNPq N° 130365/2021-1 | FAPESP N° 2016/15563-9)