AO0038 - Apresentação Oral
Área: 3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia

Ester fenetil do ácido cafeico (CAPE) controla o crescimento, biofilme e candidíase experimental por Candida auris
Barros PP, Rossoni RD, Lopes LAC, Garcia MT, Souza CM, Fuchs EB, Mylonakis E, Junqueira JC
Escola Multicampi de Ciencias Médicas - UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

Candida auris tem emergido como uma nova espécie de Candida multiresistente de difícil tratamento. O objetivo desse estudo foi investigar a ação do ester fenetil do ácido cafeico (CAPE) no crescimento, biofilme e infecção de Galleria mellonella por C. auris. Inicialmente, 10 cepas da coleção do Centers for Disease Control and Prevention (CDC) foram submetidas ao teste de concentração mínima inibitória (CIM) para fluconazol e CAPE e ao método time-kill. Posteriormente, biofilmes maduros tratados com diferentes concentrações de CAPE foram avaliados pela biomassa total (Cristal violeta) e atividade metabólica (XTT). Em G. mellonella, foram realizados ensaios de sobrevivência, contagem de hemócitos e expressão gênica de peptídeos antimicrobianos e NF-kβ. Os dados foram analisados por teste t, ANOVA e Kaplan-Meier (p<0,05). O CIM para fluconazol variou de 8 a >64, de 8 a 16 µg/mL para CAPE e o ensaio time-kill confirmou resultados obtidos na CIM. Biofilmes tratados com 40 µg/mL de CAPE apresentaram redução de 60% (p=0,0004) em relação ao controle não tratado. No modelo animal, o pré-tratamento com CAPE aumentou a taxa de sobrevivência em 46% (p<0,0001) e a contagem de hemócitos em 53% em relação ao grupo sem tratamento. Com a administração do CAPE, a expressão dos genes cecropina, gloverina, galiomicina e galerimicina foi aumentada em 4,0, 3,7, 1,2 e 2,0, respectivamente, entretanto, o gene NF-kβ foi reduzido em -2,0.
CAPE apresentou atividade antifúngica e imunomodulatória, sendo capaz de inibir o crescimento e biofilme de C. auris e prevenir a candidíase em G. mellonella.
(Apoio: FAPs - FAPESP  N° 2017/02652-6   |  FAPs - FAPESP (BEPE)  N° 2019/05664-0)

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AO0040 - Apresentação Oral
Área: 3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia

Tolerância de biofilme de Candida albicans a aplicações sucessivas de Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana
Dias LM, Klein MI, Jordão CC, Bellini A, Sousa TV, Carmello JC, Pavarina AC
UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA - ARARAQUARA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de aplicações sucessivas de Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) mediada por Photodithazine (PDZ) (25 mg/mL) associada a luz LED (18 j/cm² - 600nm) no desenvolvimento de susceptibilidade, resistência, tolerância ou persistência em Candida albicans. Culturas planctônicas e biofilmes maduros (48h) de C. albicans (ATCC 90028) foram cultivados e ajustados na concentração de 7 log₁₀. Foram realizadas 10 aplicações sucessivas dos tratamentos: aPDT (P+L+), somente FS (P+L-), somente luz LED (P-L+) e controle do experimento (P-L-). O plaqueamento das amostras de cada aplicação (Apl) foi realizada em placas com SDA (Ágar-sabourand-dextrose) suplementadas ou não com antifúngico Fluconazol (FLU) (sub-mic: 8 ug/mL). Unidades formadoras de colônia por mililitro foram determinadas (UFC/mL) (n=12). O teste de tolerância ao estresse oxidativo foi aplicado utilizando a sonda DCFH (n=12). A análise de expressão dos genes SOD1, CAP1 e ERG11 foi realizada por meio do teste de RT-qPCR (n=10). O nível de significância adotado foi de 5%. A partir da Apl 3 e 7 não foi observado presença de colônias viáveis em modelo planctônico e biofilme, respectivamente (~7 log₁₀). A produção de espécies reativas de oxigênio após aplicações de aPDT foi maior em biofilmes (230%) comparado a culturas planctônicas. A aPDT aumentou a expressão do gene SOD1 e diminuiu a expressão de CAP1 e ERG11 em biofilmes. O FLU potencializou a ação da aPDT.
Biofilme de C. albicans possui maior tolerância a sucessivas aplicações de aPDT do que culturas planctônicas
(Apoio: FAPs - FAPESP  N° 2018/14874-6  |  FAPs - FAPESP  N° 2014/50857-8)

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AO0041 - Apresentação Oral
Área: 3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia

Avaliação das propriedades antibiofilme do extrato de Pelargonium sidoides sobre Candida albicans
Reina BD, Malheiros SS, Dovigo LN
Odontologia Social - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA - ARARAQUARA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

Este estudo experimental laboratorial avaliou o efeito fotodinâmico (PDI) da solução extraída das raízes do P. sidoides (PS) sobre biofilmes formados por Candida albicans. Uma cepa de referência foi utilizada para formação de biofilmes in vitro, seguindo uma metodologia já estabelecida. As amostras foram expostas à três concentrações de PS (825, 412,5 e 206,25mg/mL) com tempo de pré-irradiação de 15 minutos e à aplicação de luz (sim/não). A fonte de luz foi um equipamento com lâmpadas LED (460nm; 50J/cm2). Foi feita também análise de Concentração Mínima para Erradicação do Biofilme (CMEB), na qual os biofilmes permaneceram em contato com o PS por 24h, sem exposição à luz. Após os tratamentos, as amostras (cada grupo com n=12) foram diluídas e plaqueadas em meio de cultura Ágar Dextrose Sabouraud, incubadas por 48h e o número de unidades formadoras de colônias por mililitro foi estimado. Os dados foram analisados com estatística descritiva, teste de Kruskal-Wallis e ANOVA a dois fatores não-paramétrica (α=0,05). Para CMEB, foi observado efeito significativo do PS sobre os biofilmes somente na concentração de 825mg/mL (p<0,05). Quando associado à luz, as concentrações de 825, 412 e 206mg/mL do PS mostraram redução significativa de viabilidade dos biofilmes em relação aos seus controles sem luz (p≤0,0001), atingindo até 3,50 log₁₀ de redução.
Dessa forma, conclui-se que a ação antifúngica do PS sobre biofilmes ocorreu somente quando associado à luz, sendo então um potencial agente fotossensibilizador em terapia fotodinâmica antimicrobiana.
(Apoio: CAPES  N° 04/2019)

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AO0042 - Apresentação Oral
Área: 3 - Controle de infecção / Microbiologia / Imunologia

Estudo dos Fatores de Virulência de Candida spp. isoladas da cavidade bucal de pacientes pediátricos em UTI
Soares-Silva L, Miyahira KM, Curvelo JAR, Portela MB, Castro GFBA
Odontopediatria e Ortodontia - UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse

O objetivo foi avaliar, in vitro, fatores de virulência (FV) e susceptibilidade ao fluconazol (FLZ), associado ou não a Clorexidina (CHX), de Candida spp. (CS) isoladas de diferentes sítios da cavidade bucal de crianças hospitalizadas em Unidade de Terapia Intensiva (UTI). Foram utilizados isolados previamente identificados (MALDI-TOF) e estocados de 30 pacientes de UTI (G1) e 30 saudáveis (G2). Os espécimes clínicos são de origem de esfregaço de mucosa (MO) e biofilme dental supragengival (B). Os isolados de CS (n=60; G1= 46 e G2= 14) foram submetidos a avaliação de FV: formação de biofilme (FB), produção de fosfolipase (PF) e protease (PP), susceptibilidade FLZ e CHX; e, checkerboard. Os resultados foram analisados e comparados pelos testes χ², Fisher e Razão de chance (95% IC) (p≤0,05). Todos os isolados de G1 e G2 FB (χ², p=0,76); PF, 3 (6,5%) isolados do G1 (C. albicans); PP, 42 isolados (91,3%), 100% de C. guilliermondii, 81,8% C. albicans, em G1; G2, 9 isolados (64,3%) (χ², p=0,025). Não houve diferença significativa quando comparamos os FV entre os isolados de MO x B, nos dois grupos. Cinquenta e um (85%) isolados foram resistentes ao FLZ, 38 (82,6%) no G1 e 13 (92,9%) no G2 (χ², p=0,47), a frequência de isolados resistentes foi similar entre os sítios (χ², p=0,40). Dois isolados foram resistentes a CHX (C. tropicalis e C. albicans) e sensíveis a combinação FLZ e CHX.
Conclui-se que os pacientes internados em UTI apresentam maior freqüência de isolados de CS PP e que isolados de B são virulentos quanto os de MO. A combinação de FLZ e CHX foi eficiente no controle do crescimento.
(Apoio: CAPES  N° 001)

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